Terapia epigenómica en la Neumonía

Tema: La inhibición de las desacetilasas de histonas protege a los ratones sépticos de la apoptosis pulmonar y esplénica.

Mecanismo epigenómico tratado : Inhibición de las desacetilasas de histonas

¿Cómo se lo hizo?

Examinamos si la histona desacetilasa (HDAC) puede contribuir a la inflamación asociada a la sepsis y la apoptosis.

La sepsis polimicrobiana fue inducida por la ligadura y punción cecal (CLP) en ratones BALB / c. Se administró una inyección intraperitoneal de CG200745 (10 mg / kg), un nuevo inhibidor de HDAC de amplio espectro, o ácido valproico (500 mg / kg), un inhibidor predominante de HDAC de clase I, 3 h antes de la cirugía.

Resultados:

• Los niveles de proteína HDAC1, HDAC2 y HDAC3 disminuyeron en los pulmones después de CLP.
• La sepsis inducida por CLP aumentó los niveles de acetilación de histonas H3 y H4 en los pulmones.
• Cuando se administró CG200745, la inducción de apoptosis fue fuertemente suprimida en pulmones y bazos de ratones sépticos.
• Este efecto antiapoptótico de CG200745 no estuvo acompañado por una regulación positiva de las proteínas antiapoptóticas y negativas de las proteínas proapoptóticas de los miembros de la familia Bcl-2
• El tratamiento con CG200745 no logró inhibir los niveles elevados de citocinas séricas y evitar la inflamación pulmonar en ratones sépticos
• El ácido valproico también mostró efectos antiapoptóticos pero no antiinflamatorios en ratones sépticos.
• 
• Bibliográfia

1.- Takebe M, Oishi H, Taguchi K, Aoki Y, Takashina M, Tomita K et al. Inhibition of histone deacetylases protects septic mice from lung and splenic apoptosis. Pub Med US National Library of Medicine National Institutes of Health [Internet]. Disponible en:  https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24290430

Técnica de edición de ADN en la neumonía

1. Tipo de edición: Células somáticas in vivo.
2. Dirigido hacia: ADN
3. Dirigido por: Electroporación Pulmonar por un plasmido, OAS.
4. Órgano a tratar: Pulmón (parénquima pulmonar y epitelios).
5. Vía de administración: Vía intravenosa.
6. Resultados: A corto plazo los resultados no son notorios pero a mediano plazo podemos evidenciar que el efecto la transmisión genética de las subunidades de la bomba sodio-topacio ATPasa mejoraron el movimiento de agua y sal hacia afuera del pulmón disminuyendo a su vez la severidad de la respuesta inflamatoria. Y a largo plazo se puede identificar que se genera una reducción de la mortalidad de 44 % en pacientes con neumonía y septicemia.

Referencia bibliográfica: 

Referencia.

1. Machado D. El uso de terapia genética pulmonar en el tratamiento de modelos experimentales de neumonía y septicemia. [Internet]. USA: PMC; 2018. (Consultado 06 enero 2020). Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6086359/

Stem Cells

Las células madre mesenquimales mejoran la supervivencia y el aclaramiento de bacterias en murino Escherichia coli neumonía

Tipo de Stem Cells: Células madre mesenquimales (MSCs) singénicas de ratones (médula ósea) 

Método de obtención : kits de ELISA (R&D)

Resultados: 

El tratamiento con MSC mejoran la supervivencia y el fenotipo de la E coli.

MSC reducen la gravedad de la lesión pulmonar en el E coli 

El bloqueo de la lipocalina 2 inhibe la actividad antibacteriana in vivo en de MSCs.

Co-cultivo de MSCs estimuladas con LPS y los macrófagos alveolares aumenta la producción de lipocalina 

Referencia Bibliográfica: 

Gupta N, Mouded M, Tan X. Las células madre mesenquimales mejoran la supervivencia y el aclaramiento de bacterias en murino Escherichia coli neumonía. 2012;  (Citado el 26 de diciembre del 2019) Disponible en: http://thorax.bmj.com/content/67/6/533

Transgénico Vegetal

USOS DEL TERRITORIO, ACUMULACIÓN POR DESPOSESIÓN Y DERECHO A LA SALUD EN LA ARGENTINA CONTEMPORÁNEA: EL CASO DE LA SOJA TRANSGÉNICA

Peralta et al (2011, p. 18 y 23), halló significativa correlación entre el modelo sojeroy la incidencia de patologías graves en la localidad cordobesa (Argentina) de Marcos Juárez: en el 56,3% de los casos observaron afecciones respiratorias (Neumonía), dermatológicas, digestivas y neurológicas crónicas; el 40% de las mujeres encuestadas refirió trastornos reproductivos. Para observar como actúa este producto específicamente sobre la Neumonía, entrar en el link del artículo científico.

Ventajas  del uso de transgénicos: 

- La soja (Argentina) transgénica es tolerante a la sequía y tiene un mejor control de malezas. (Aprobada por el gobierno argentino)

- Uno de los beneficios de los alimentos transgénicos es que son más eficientes en términos productivos.

- Los alimentos transgénicos se podrían diseñar de tal forma que aumentasen sus nutrientes.

- Podría cubrir el problema de alimentación a nivel mundial.

- Cuantificación de Sabores nuevos en el producto.

Desventajas: 

- Posibles efectos negativos a largo plazo en la salud.

- Tendría una posible relación con el desarrollo de enfermedades.

- Invasión del ecosistema debido a que surge una producción sin control, por parte del agricultor.

- Posibles intoxicaciones debido a alergias o intolerancia a los alimentos procesados.

- Contaminación del suelo.

Bibliografía:

Sebastían Gómez Lende. USOS DEL TERRITORIO, ACUMULACIÓN POR DESPOSESIÓN Y DERECHO A LA SALUD EN LA ARGENTINA CONTEMPORÁNEA: EL CASO DE LA SOJA TRANSGÉNICA. Argentina 2017. [Citado el 19 de diciembre del 2019] Disponible en:https://ri.conicet.gov.ar/bitstream/handle/11336/27001/CONICET_Digital_Nro.28e60aed-69f0-4cf7-9805-caf3cf298f12_A.pdf?sequence=2&isAllowed=y

DNA Recombinante

TEMA: CARACTERIZACIÓN MOLECULAR; CLONACIÓN Y EXPRESIÓN DEL GEN DE LA TOXINA A DE CEPAS SILVESTRES DE Staphylococcus aureus
OBJETIVO: Caracterizar molecularmente el gen de la toxina A de cepas silvestres de S. aureus mediante secuenciación y predicción de su estructura, clonar y expresar el gen que codifica para la enterotoxina A de S. aureus en E. coli.
GEN: Gen completo de la toxina A.
ENZIMA DE RESTRICCIÓN: PstI, DraI, EcoRI, HindIII y RsaI.
ENZIMA LIGASA: T4.
VECTOR: pGen T (promega)
CÉLULA RECEPTORA: E. coli DH5a
MECANISMO DE TRANSFERENCIA O INSERCIÓN DEL GEN: Transformación.
MÉTODOS DE IDENTIFICACIÓN DE CLONES: Cultivo y Western Blot.

Bibliografía:
1.-Tania S, Lourdes B, Carmen G, Rocío I, Quintín R, Gilberto E. Caracterización molecular; Clonación y expresión del gen de la toxina A de cepas silvestres de staphylococcus aureus. Congreso Nacional de Biotecnología y Bioingeniería. [online] España 2012. [Citado el 13 de diciembre del 2019]. Disponible en:https://smbb.mx/congresos%20smbb/morelia07/TRABAJOS/Area_VI/Orales/OVI-23.pdf

Recombinación de ADN en la naturaleza para la neumonía

La naturaleza genera transgénicos de forma infrecuente, como por ejemplo determinados agentes infecciosos incorporan su material genético al genoma de su huésped. La bacteria Agrobacterium Tumefaciens incorpora su material genético a los vegetales que infecta, lo que induce a una malformación llamada tumor de la agalla. Se establece con la planta una especie de "colonización genética" que obliga a la planta a fabricar una sustancia de la que solo se puede nutrir esta bacteria, el T-DNA entra en el núcleo, se inserta al azar en algún del genoma y expresa sus dos genes.

Referencia Bibliográfica: 

1. Wang A and Cheg Q. Recombinación entre vacunas y cepas de campo del virus del síndrome respiratorio. [Internet]. USA: PUBMED; 2019. (Consultado 05 diciembre 2019). Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/31742529

RT-PCR cuantitativa específica y sensible de miRNAs con cebadores de ADN

La PCR cuantitativa de muestras biológicas se realizó en 10 μl de volumen total con 1 μl de ADNc diluido 8-10 veces, 5 μl de 2x mezcla maestra de PCR QuantiFast SYBR Green (Qiagen, Alemania), 250 nM de cada cebador o 2 μl microRNA LNATM cebador conjuntos (Exiqon, Dinamarca). Se realizaron curvas estándar con diluciones de 10 veces para todos los ensayos para calcular la eficiencia de qPCR.(1)
Se usaron las mismas condiciones de PCR para las plantillas sintéticas, excepto que se usó 1 μl de plantilla sintética en 2 ng / μl de ADN de esperma de salmón (Sigma, EE. UU.) En TE en lugar de ADNc. Se utilizó 2x Brilliant III Ultra-Fast QPCR Master Mix (Agilent, EE. UU.)
Las condiciones de ciclismo fueron 95 ° C durante 5-10 min seguidas de 40 ciclos de 95 ° C durante 10-30 segundos y 60 ° C 30-60 segundos. Se realizó un análisis de la curva de fusión (60 ° C a 99 ° C) después del perfil térmico para garantizar la especificidad en la amplificación.
El QPCR de muestras biológicas se realizó en una máquina MX3000P (Stratagene, EE. UU.) Y las reacciones que contienen plantillas sintéticas se realizaron en un Rotorcycler (Qiagen, Alemania). Los cebadores enriquecidos con LNA fueron conjuntos de cebadores de microRNA LNA ™ PCR diseñados por Exiqon (Dinamarca)(1)

La cuantificación se basó en la determinación del ciclo de cuantificación (Cq) y la eficiencia de la PCR se calculó a partir de la porción logarítmica lineal de las curvas estándar(1)

Referencias Bibliográficas:

1.- Balcells, I., Cirera, S. & Busk, P.K. Specific and sensitive quantitative RT-PCR of miRNAs with DNA primers. BMC Biotechnol 11, 70 (2011) doi:10.1186/1472-6750-11-70